無菌藥品的要求應(yīng)該算在制藥行業(yè)中最為嚴格。近些年，藥品質(zhì)量控制的觀念也在不斷發(fā)生改變，從“檢驗控制藥品質(zhì)量”到“通過生產(chǎn)過程控制”，繼而又到“質(zhì)量源于設(shè)計”理念。
質(zhì)量控制，特別無菌檢查的可信度很低，憑無菌檢查結(jié)果來判斷批次是否無菌并不能確保無菌藥品的質(zhì)量。最終產(chǎn)品的無菌絕不能只參考質(zhì)量檢測下定論。
藥品生產(chǎn)過程必須嚴格遵守工藝流程，藥品生產(chǎn)所需的潔凈區(qū)是無菌生產(chǎn)的基本要求。潔凈室內(nèi)的微生物種類和數(shù)量是無菌藥品質(zhì)量控制中重要參考內(nèi)容。潔凈室監(jiān)控參數(shù)主要有：溫濕度、壓差、換氣次數(shù)、風(fēng)速、氣流流型、懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物與人員微生物等。微生物檢測是潔凈室檢測中的尤為重要指標。
各類微生物污染來源
借著【金佰利杯】這次契機，本人就從比較新穎的角度，即通過潔凈區(qū)檢出菌的數(shù)量和種類，所反應(yīng)出來的藥品無菌生產(chǎn)工藝中的問題。
通常來說，潔凈室微生物污染來源和種屬概括如下：
潔凈區(qū)檢出菌的鑒別在污染調(diào)查中非常有用。
新版GMP要求，需對環(huán)境及不同階段產(chǎn)品監(jiān)控的微生物進行鑒定，并建立污染菌種庫，便于對日常監(jiān)測中出現(xiàn)異常菌株與菌種庫進行比對，查找其來源，以便采取有效措施。
通常，潔凈區(qū)里典型的污染菌主要來自：
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人體表面：革蘭氏陽性球菌為主
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其次是環(huán)境：革蘭氏陽性桿菌為主
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和各種水源：革蘭氏陰性桿菌為主的微生物
數(shù)據(jù)表明，在所有級別的潔凈區(qū)中，檢出菌類別的比例大概如下：
污染來源舉例分析
檢出菌的鑒定在無菌保障工藝中非常重要，可以反映出許多細節(jié)。
舉例如下：
1、當(dāng)潔凈區(qū)檢出菌庫的類別以革蘭氏陽性球菌屬為主的情況下，大致符合上述比例，表明潔凈室繼續(xù)在正常范圍內(nèi)起作用，不必過分擔(dān)憂。
2、 潔凈區(qū)檢出菌中，皮膚相關(guān)的微生物最常見，微球菌屬和葡萄球菌屬占50%以上，第二個最常見的屬是芽孢桿菌屬約占13%。
雖然革蘭氏陽性微生物在潔凈室中普遍存在，但其實對于葡萄球菌和微球菌屬，許多物種是人類身上固有的微生物。應(yīng)注意調(diào)查此部分微生物的被采集者，加強培訓(xùn)，提高人員的無菌意識，規(guī)范人員更衣程序和潔凈區(qū)行為。
3、微球菌屬中藤黃微球菌檢出率最高，它是藥物環(huán)境監(jiān)測中最常見的微生物之一。通常與人體皮膚有關(guān)，尤其是與頭部，手臂和腿部有關(guān)。無菌技術(shù)的缺陷以及潔凈室管理不善是藤黃微球菌污染的常見原因。
4、芽孢桿菌屬中蠟狀芽孢桿菌檢出率最高，蠟狀芽孢桿菌的孢子通常被確定為最難消毒和根除的。根據(jù)檢出地點，應(yīng)引起足夠重視。
5、丙酸桿菌和棒狀菌毋庸置疑來自于人體。
但當(dāng)某短時間在高級別潔凈室中頻繁檢出如人表皮葡萄球菌屬、丙酸桿菌屬等來自于人體的微生物，應(yīng)注意生產(chǎn)過程中，規(guī)范人員更衣程序和潔凈區(qū)行為?；蛘咴u估所穿潔凈服的過濾能力，潔凈服由于反復(fù)滅菌使用，并無法保證所有重復(fù)使用的潔凈服都具有相同的過濾性能。
6、革蘭氏陽性桿出現(xiàn)在物體表面的頻率更高。
與 AB級潔凈區(qū)相比，CD級潔凈室中，革蘭氏陽性桿的數(shù)量相對較高。這符合正?，F(xiàn)象，因為物品進入低級潔凈室的清潔消毒程序往往較不嚴格。
7、 潔凈區(qū)中革蘭氏陰性桿菌和真菌的檢出率較低。但意味更深遠。應(yīng)引起特別重視。
8、 潔凈區(qū)中革蘭氏陰性桿菌的比例指示水源污染程度。
在D級潔凈室中， 革蘭氏陰性桿菌占分離物的比例要大得多。這也反映了在這些地區(qū)水槽（水源）較多。
若在A B潔凈室中革蘭氏陰性桿菌的比例較高，應(yīng)引起重視?？赡芘c潔凈室濕度設(shè)置過高有關(guān)，或部分水漬未及時清理擦干，也存在制藥用水過濾除菌不夠徹底的可能。企業(yè)可以實行無水化管理。
9、 在檢出菌的鑒別中，葡萄球菌的不同種屬的鑒定可能挖掘不出太多有用的信息；但在B級潔凈室中鑒別到假單胞菌樣則意味著很多，務(wù)必需要擴大調(diào)查。
10、 絕大多數(shù)來自潔凈區(qū)的細菌是中溫好氧或兼性需氧菌。但在使用特殊氣體，有時與冷凍干燥機相關(guān)聯(lián)的情況下，部分細菌可在厭氧條件下生長和被發(fā)現(xiàn)。
如痤瘡丙酸桿菌可能在凍干制品中被發(fā)現(xiàn)，因為本菌為厭氧或兼性厭氧，是無菌灌封中令人頭痛的一個微生物《2010GMP實施指南：無菌制劑》，根據(jù)經(jīng)驗，該微生物直到在培養(yǎng)基中培養(yǎng)12 天后才能生長到肉眼可以觀察的濃度。
11、 芽孢污染是制藥企業(yè)車間較為嚴重的污染之一，應(yīng)注意每月交替更換消毒劑，使用殺孢子劑定期殺滅芽孢。
12、潔凈區(qū)中真菌的檢出率也很低。如果真菌的發(fā)生率較高，鑒于真菌的生長特性，反映了一些潔凈室的濕度較高或者通風(fēng)不良。
特別每年梅雨季節(jié)時，空氣濕度大，真菌可能快速生長繁殖，如果物品傳遞、脫包消毒程序不夠完善，未經(jīng)處理的外氣流流入或者物品和人員可能攜帶微生物帶入潔凈區(qū)。
潔凈室一旦有大量真菌污染，采用紫外消毒或消毒液不易殺滅，以致無菌保障水平得到嚴重破壞，應(yīng)當(dāng)重視潔凈區(qū)真菌污染。
13、無菌測試結(jié)果為陽性時，檢出菌應(yīng)當(dāng)鑒定到種。
應(yīng)當(dāng)回顧微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)，確認污染源自測試中所使用的物料或技術(shù)的差錯，可判該測試無效，否則判該批次不符合要求，應(yīng)調(diào)查生產(chǎn)或?qū)嶒炇掖嬖趩栴}，并深入全面地調(diào)查整個生產(chǎn)工藝。
最后，潔凈區(qū)檢出菌所反應(yīng)出的信息遠不止上述內(nèi)容，我們目前還只是管中窺豹。無菌保障工藝中關(guān)鍵的方面，是將污染數(shù)據(jù)與污染控制措施相關(guān)聯(lián)。重點分析微生物趨勢并采取相應(yīng)措施。
通過檢出菌鑒別盡可能找到污染源，消除或減少污染源頭的風(fēng)險比依靠空氣過濾或清潔程序更有意義。